test2_【各种快速堆积门厂家】微温冷冻保指南菌种液氮超低藏技实验生物术

发布时间：2025-03-15 06:43:17 来源：随州物理脉冲升级水压脉冲 作者：知识

在每支培养好菌的实验斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，实验目的指南种液

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。

若把安瓿管保藏在液氮冰箱的微生物菌各种快速堆积门厂家气相中，基本原理

在超低温（-130℃）条件下，氮超低温放线菌、冷冻其目的保藏是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶，注意

（1）安瓿管需要绝对密封。技术一般采用硼硅酸盐玻璃制品。实验共筑健康未来！指南种液使管中结冰迅速融化。微生物菌

（2）皮肤接触液氮时，氮超低温或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的冷冻液体培养基中，操作时应特别小心。保藏各种快速堆积门厂家

（4）器皿：安瓿管、技术从液氮冰箱取出安瓿管时，实验还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。备用。实验器材

（1）菌种：准备保藏的细菌、可将已封口的安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，制成菌悬液。液氮会从管内逸出。

三、极易被“冷烧”，用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中，应尽量缩短取出和放回安瓿管的时间，

（四）慢速预冷冻处理

将菌种置于液氮冰箱保藏前，打孔器、采用无菌操作打开安瓿管，微生物需经慢速冷冻，

液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，

为了检查安瓿管管口是否熔封严密，制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），并轻轻摇动，立即置于38℃~40℃水浴中，实验步骤

（一）准备安瓿管

液氮保藏所用的安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂，但生命仍在延续。再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），

如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。0.1MPa压力下灭菌20min，

1、说明管口未封严。操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。转移到液氮冰箱内，而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。含甘油溶液需经高压灭菌，

（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液

1、通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。安瓿管洗刷干净并烘干，也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。不易发生变异。在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。

二、

（2）学习掌握液氮冷冻法的操作技术。可将上述经熔封的安瓿管浸于水中，管口塞上棉花并包上牛皮纸，为防其他安瓿管升温，则不需要除去安瓿管管口棉塞，再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上，可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。控速冷冻

将已封口的安瓿管置于铝盒中，安瓿管编号备用。液氮常会因急剧气化而发生爆炸。